Тромбоциты. Антитромбины II и III

Подтверждением такой точки зрения является то, что нейтрализация тромбина и замедление свертывания крови под действием гепарина в наших опытах, приводит к уменьшению адгезивного индекса. При этом количество тромбоцитов несколько увеличивается, а количество эритроцитов продолжает уменьшаться так, что по сравнению с исходным уровнем степень изменения их количества становится почти одинаковой (соответственно 81,8 и 82,1%). Исходя из этого можно допустить, что тромбоциты, утратившие повышенную прилипчивость, могут отлипать от эндотелия, хотя не исключено, что восстановление количества тромбоцитов после введения гепарина может происходить и другими путями (перераспределение, новообразование).

 

Наши данные о повышении адгезивной способности тромбоцитов после острой кровопотери были подтверждены Сванк (1962), который в опытах на собаках нашел, что после выпускания 20-35% крови тромбоциты и лейкоциты становятся более прилипчивыми при пропускании их через микрофильтр. Однако никаких сопоставлений с изменениями свертываемости крови в этой статье не представлено.

 

Ускорение свертывания крови может быть обусловлено не только увеличением факторов, стимулирующих коагуляцию, но и уменьшением веществ, тормозящих ее, поэтому было изучено состояние некоторых антикоагу-ляционных механизмов при гиперкоагулемии после острой кровопотери.

 

Среди физиологических антикоагулянтов, как уже указывалось, более подробно изучены антитромбины. Фибрин, адсорбирующий на своей поверхности тромбин, является антитромбином 1. Потенциальные возможности для образования антитромбина 1 определяются количеством фибриногена. Изменения концентрации фибриногена в процессе повышения свертываемости крови после кровопотери.

 

В серии опытов на кроликах определяли раздельно активность антитромбинов II и III по методу Витте и Дирнбергера (1953, 1954).

Реактивы. 1. Испытуемая плазма. Смешивали одну часть 0,1 М раствора оксалата натрия и 10 частей крови, центрифугировали 20 мин при 2500 об/мин. Для определения антитромбина II плазму смешивали с буферным раствором 1:1.

  1. Универсальный ацетатно-вероналовый буфер (рН = 7,6).
  2. Раствор фибриногена. 30 мг сухого фибриногена (А. Н. Филатов, Л. Г. Богомолова, И. Г. Андрианова, 1959) растворяли при 37° в 2,5 мл 0,85% раствора хлористого натрия. После полного растворения прибавляли 2,5 мл буферного раствора.
  3. Стандартный раствор тромбина. Сухой препарат тромбина ИЭМ растворяли в буферном растворе так, что при добавлении 0,1 мл этого раствора к 0,2 мл раствору фибриногена при 37° происходило свертывание точно в у сек. На протяжении опыта раствор тромбина хранили Ь силиконированной пробирке, помещенной в тающий лед. В последующем, в работе Т. В. Варецкой, А. Л. Лосевой и В. И. Яценко (1961) были доказаны преимущества сохранения тромбина в силиконированной посуде.

 

Процедура определения антитромбина II (тромбин-ингибитора). К 0,2 мл раствора тромбина прибавляли 0,2 мл испытуемой плазмы, однократно встряхивали и оставляли при 20° на 9 мин. За 20 сек до истечения времени инкубации удаляли образовавшийся фибрин. Через 9 мин 0,1 мл смеси плазмы с тромбином прибавляли к 0,1 мл раствора фибриногена при 37°. Время свертывания характеризует суммарную активность антитромбина II и III. Во второй параллельной пробе плазму нагревали до 56° на протяжении 3 мин, быстро охлаждали в водяной бане со льдом. Денатурированный фибриноген отделяли центрифугированием. Гретую плазму разводили равным объемом буферного раствора. Смешивали 0,2 мл этого раствора и 0, 2 мл раствора тромбина. Спустя 9 мин путем прибавления 0,1 мл этой смеси к 0,1 мл раствора фибриногена при 37° определяли количество остаточного тромбина. Полученное время свертывания вычитали из величины, полученной для плазмы, не подвергнутой нагреванию. Разность дает чистую величину тромбинингибитора.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *